培養(yǎng)細(xì)胞基本形態(tài)

    培養(yǎng)細(xì)胞zui常見的是貼附于平面支持物細(xì)胞。在一般光鏡下生存中的細(xì)胞是均質(zhì)而透明的，結(jié)構(gòu)不明顯。細(xì)胞在生長期常有1-2 個核仁。在細(xì)胞機(jī)能狀態(tài)不良時，細(xì)胞輪廓會增強(qiáng)，反差增大。若胞質(zhì)中時而出現(xiàn)顆粒、脫滴和腔泡等，表明細(xì)胞代謝不良。體外培養(yǎng)細(xì)胞根據(jù)它們在培養(yǎng)器皿是否能貼附于支持物上生長特征，可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細(xì)胞在培養(yǎng)時能貼附在支持物表面生長。如羊水細(xì)胞為貼附型細(xì)胞，常表現(xiàn)為成纖維型細(xì)胞和上皮細(xì)胞生長。懸浮型細(xì)胞在培養(yǎng)中懸浮生長。

    哺乳動物細(xì)胞冷凍保存

    主要目的：

    （1）保存種子細(xì)胞，以便隨時取用。這是保存細(xì)胞的zui主要目的。

    （2）減少細(xì)胞被微生物污染的危險性。

    （3）減少細(xì)胞之間交叉污染的危險性。

    （4）減少細(xì)胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。

    （5）避免有限細(xì)胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。

    (6) 降低人力和物力。

    冷凍保存細(xì)胞的解凍與復(fù)蘇要點：慢凍快融

    （1）快速解凍。凍存細(xì)胞從液氮中取出后，應(yīng)立即放入 37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化（不要超過 3 分鐘）。

    （2）解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細(xì)胞變得非常脆弱，不僅解凍速度要快，而且動作要輕。一般情況下，解凍后的細(xì)胞可直接接種到含*生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)（1ml 凍存細(xì)胞液加入到 25－30ml 新鮮*培養(yǎng)液中），24 小時后再用新鮮*培養(yǎng)替換舊培養(yǎng)液，以去除 DMSO。如果，細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感，那么，解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含*生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。

    特別注意：

    （1）解凍時務(wù)必注意安全，預(yù)防冷凍管爆裂。，要帶手套，用鑷子將細(xì)胞冷凍管從液氮中取出，放入 37℃水浴中。切不可直接用手，以免凍傷。

    （2）冷凍管在水浴中解凍時，要將凍存管蓋子擰緊，確定擰緊后再投入水浴鍋中，注意液面不可超過凍存管蓋面，否則，易發(fā)生污染。